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流式液相多重蛋白定量技術

流式液相多重蛋白定量技術

Cytometric Beads Array (CBA)



 BD-Pharmingen成功研發了基于流式細胞儀檢測平臺的液相多重蛋白定量技術——BD Cytometric Bead Array,簡稱CBA。CBA是一系列帶有不同強度紅色熒光、包被有捕獲抗體的微球,類似ELISA的捕獲孔板,可以捕獲液相樣本(血清、血漿或者細胞培養上清液等)中相應的抗原,再結合PE標記檢測抗體,形成雙抗體夾心結構,通過流式細胞儀進行熒光檢測,便可同時對樣本中的多種可溶性蛋白成分進行定量。


常規的蛋白分析方法:

    ELISA:一次反應只能檢測一個指標

    Western blot:不能對蛋白精確定量

    不足之處:

        檢測多個指標需耗費大量樣本

        分批操作導致組間差異大

        操作繁瑣,耗時耗力

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流式液相多重蛋白定量技術流程圖


操作步驟

    1、檢測物與捕獲微球共孵育。

    2、洗滌。

    3、標記熒光探測試劑(FITC或PE標記)。

    4、洗滌。

    5、流式細胞儀上機檢測。

    6、CBA分析軟件批量數據分析。


Human Th1/Th2 Lymphokine CBA

         Th1/Th2 panel: IL2, IL4, IL5, IL10, TNF-α, IFN-γ


DNA倍體分析:DNA分析是流式細胞儀最初且是現在應用最廣檢測項目。由于惡性細胞DNA含量通常與正常細胞不同,存在異倍體細胞,所以現有很研究評價異倍體細胞與腫瘤惡性度及其預后的關系。DNA含量檢測還可提供細胞周期方面的信息,這在細胞生物學中運用很廣泛。特別地,它可表示出細胞毒性藥物對細胞作用過程。這些DNA檢測還可與細胞表面標志物標記同時進行,這樣在細胞混合培養中,可通常追蹤表達特異標志物的細胞顯示其生長周期情況。

所有方法都是基于染料能與核酸起特異的化學反應并發射出熒光,常用的染料為PI,DAPI。

流式細胞儀要求:488nm光源,575nm濾光片。

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標準微球

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標準曲線繪制

   

                             CBA 分析軟件                                                                             CBA 分析軟件

與傳統的ELISAs檢測相比優勢

        能夠同時對單一樣本進行多種目的蛋白檢測;

        較傳統檢測節省樣本量(50μl);

        與ELISAs相比靈敏度高(2.8pg/ml)、重復性好;

        檢測的線性范圍寬(0-5000pg/ml);

        所有分析只需一組標準曲線;

        避免酶聯反應所致人工假象;

        強大的CBA分析軟件;

        節省操作時間、檢測時間和分析時間.


CBA/CBA Flex set的應用領域

 血清、血漿、眼淚、房水、唾液、體腔灌洗液、細胞培養液上清、細胞裂解物等各種液相樣本中可溶性細胞因子、炎癥因子、趨化因子、酶等的濃度檢測;

 細胞信號傳導中磷酸化蛋白、凋亡相關蛋白定量分析;

 免疫疾病或傳染疾。ㄈ缪鄄考膊、類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡、新生兒溶血癥及膿血癥、病毒性感染等)的輔助診斷和監控;

 腫瘤研究;

 藥效評價,藥物研發、疫苗研究;

 總體免疫功能分析等;


現有CBA Kit產品

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